兴文县甜菊糖苷
(四)辅助因素对产率的影响研究表明,在低熔点混合物中加入适宙:的有机溶剂能降低混合物的熔点,从 而提商酶反应的效率。图2-66所示为加入不同溶剂对反应产率的影响。其中, 加入二甲基亚砜(DMSO)和2-甲氧基乙酸乙酯(MEA>能使产率达到60%, 而辛醉和正己烷的加人使产率低于50%。这可能是因为疏水性的有机溶剂能够 改进和保持低熔点混合物的特性,从而能够促进酶反应的产率。图2 -66 不同辅助有机溶剂对反应产率的影响 注:有机溶剂都按丨5% (w/w)的比例加人,苄氧羰基-L-天冬氨酸二乙《和D-内氨酰胺分 别加人0.5mmOl, -胰凝乳蛋f*丨酶浓度为丨5% (w/w)和丨2% (w/w)的水,37?€下反庖丨Oh。表2-37同时加入DIV1SO和MEA作为低熔点混合物的辅助因子对反应产率的影响 转化菌株TB2bl -44中已含有B2作启动子的表达盒,再经质粒pG丨)71 (该 质粒含有gdhA启动子和潮霉素抗性基因作标记基因的表达盒)转化得到双转化 体(double transfonrnin丨),从中选择产率较高的双转化体TB2bl - 44 - GD4、 -GD5、-GD6、-GD7在MDFA优化培养基摇瓶培养后达到最高的表达水平 (一)阿力甜的化学结构阿力甜(Alitame)的化学结构如图2-58所示,它由L-天冬氨酰、D-丙 氨酸和C -端酰胺三部分组成。C -端的酰胺是由2, 2, 4, 4 -四甲 基-thienanyl-胺转化而成,它是形成阿力甜髙甜度特性的关键因素。在研究过 程的I.-天冬氨酰-D -丙氨酸-酰胺同型物中,分析认为对髙甜度特性有益的 结构特征: Jin等人为了进一步探求Brazzein的结构-功能关系,在猴子和人体身上进行 了试验。以des-pGlu Brazzein、25 Brazzein突变体和英奈林作为刺激物,将所有这 些蛋白质都溶解至浓度为HXVg/mL的溶液,调节pH至7.0。在猴子试验中, Jin等人通过观察个别的S味觉纤维来记录猴子对上述几种甜味剂的甜味刺激反应。 S纤维的选择标准是它们对甜味刺激的敏感度^在人体试验中,受试人对甜味刺激 物的甜度进行评分,接者把人体试验结果与猴试验电生理学结果进行分析对比。 0=C 0 ^^ 0=C OH 图2 - 88 阿斯巴甜的5种类似物 对蔗糖和三氣蔗糖AH、B、X生甜团的分析发现,整个果糖基部分在充当 疏水部位X角色中的重要性,这些疏水部位既不是固定不动的,也不是一成不 变的,它甚至可以经过诱导作用扩展到呋喃果糖基之外的葡萄糖基单元上。如蔗 糖的两对AH、B双功能实体r-OH/2-O和3f-0H/2-0,前者连接三个Kier 的疏水部位于T -CH2、6 -012和& _CH2,后者连接两个这样的中心于 r-CH2|fl6-CH20 其中1997年,Kirin Co. ( Kanagawa,日本)的Kondo K等人的研究成果最为 引人注目。他们将人工合成的莫奈林基因克隆至产阮假丝酵母(CandUia utilis)细 胞内进行表达,莫奈林表达水平达到细胞可溶性蛋A的50%,莫奈林得率达 10mg/g湿酵母,该得率与从植物提取的最大得率相当,并且所得的莫奈林分离 纯化工艺非常简单,所用的C._7i5又是食用性酵母,因此采用该方法将能实现 英奈林的商业化生产,从而大大推进兑奈林的商业化开发进程。这里对该研究做 一介绍。